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基因工程的基本操作步骤主要包括四步：1、目的基因的获取。2、基因表达载体的构建。3、将目的基因导入受体细胞。4、目的基因的检测与表达。其中，构建基因表达载体是基因工程的核心步骤。

解析：基因工程技术的基本步骤：1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法。将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法。将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

4、目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因DNA分子杂交技术。检测目的基因是否转录出了mRNA分子杂交技术。检测目的基因是否翻译成蛋白质抗原抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

基因工程的基本操作程序

8、基因工程简介

(1)基因工程的概念

标准概念：在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组细胞在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。

通俗概念：按照人们的意愿，把一种生物的个别基因复制出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。

(2)基因操作的工具

A.基因的剪刀——限制性内切酶(简称限制酶)。

①分布：主要在微生物中。

②作用特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点。

③结果：产生黏性未端(碱基互补配对)。

B.基因的针线——DNA连接酶。来源:https://faiemp.cn/bkjj/202412-43.html

①连接的部位：磷酸二酯键，不是氢键。

②结果：两个相同的黏性未端的连接。

C.基困的运输工具——运载体

①作用：将外源基因送入受体细胞。

②具备的条件：a、能在宿主细胞内复制并稳定地保存。b、 具有多个限制酶切点。

c、有某些标记基因。

③种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。

④质粒的特点：质粒是基因工程中最常用的运载体。

(3)基因操作的基本步骤

A.提取目的基因

目的基因概念：人们所需要的特定基因，如人的胰岛素基因、抗虫基因、抗病基因、干扰素基因等。

提取途径：

B.目的基因与运载体结合

用同一种限制酶分别切割目的基因和质粒DNA(运载体)，使其产生相同的黏性末端，将切割下的目的基因与切割后的质粒混合，并加入适量的DNA连接酶，使之形成重组DNA分子(重组质粒)

C.将目的基因导入受体细胞

常用的受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌、动植物细胞

D.目的基因检测与表达

检测方法如：质粒中有抗菌素抗性基因的大肠杆菌细胞放入到相应的抗菌素中，如果正常生长，说明细胞中含有重组质粒。

表达：受体细胞表现出特定性状，说明目的基因完成了表达过程。如：抗虫棉基因导入棉细胞后，棉铃虫食用棉的叶片时被杀死;胰岛素基因导入大肠杆菌后能合成出胰岛素等。

(4)基因工程的成果和发展前景 A.基因工程与医药卫生B.基因工程与农牧业、食品工业

C.基因工程与环境保护

记忆点：

1. 作为运载体必须具备的特点是：能够在宿主细胞中复制并稳定地保存;具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接;具有某些标记基因，便于进行筛选。质粒是基因工程最常用的运载体，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，是能够自主复制的很小的环状DNA分子。

2.基因工程的一般步骤包括：①提取目的基因 ②目的基因与运载体结合 ③将目的基因导入受体细胞 ④目的基因的检测和表达。

3.重组DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。

4.区别和理解常用的运载体和常用的受体细胞，目前常用的运载体有：质粒、噬菌体、动植物病毒等，目前常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。

5.基因诊断是用放射性同位素、荧光分子等标记的DNA分子做探针，利用DNA分子杂交原理，鉴定被检测标本的遗传信息，达到检测疾病的目的。来源:https://www.faiemp.cn/cshi/202501-165.html

6.基因治疗是把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的。

9 、生物的进化

(1)自然选择学说内容是：过度繁殖、生存斗争、遗传变异、适者生存。

(2)物种：指分布在一定的自然区域，具有一定的形态结构和生理功能，而且在自然状态下能够相互交配和繁殖，并能产生出可育后代的一群个体。来源:https://ewtuny.cn/xwzx/202412-23.html

种群：是指生活在同一地点的同种生物的一群个体。来源:https://www.faiemp.cn/xwzx/202412-113.html

种群的基因库：一个种群的全部个体所含有的全部基因。

(3)现代生物进化理论的基本观点：种群是生物进化的基本单位，生物进化的实质在于种群基因频率的改变。突变和基因重组、自然选择及隔离是物种形成过程的三个基本环节，通过它们的综合作用，种群产生分化，最终导致新物种的形成。

(4)突变和基因重组产生生物进化的原材料，自然选择使种群的基因频率定向改变并决定生物进化的方向，隔离是新物种形成的必要条件(生殖隔离的形成标志着新物种的形成)。

现代生物进化理论的基础：自然选择学说。来源:https://faiemp.cn/cshi/202501-172.html

记忆点：来源:https://faiemp.cn/bkjj/202412-78.html

1.生物进化的过程实质上就是种群基因频率发生变化的过程。

2.以自然选择学说为核心的现代生物进化理论，其基本观点是：种群是生物进化的基本单位，生物进化的实质在于种群基因频率的改变。突变和基因重组、自然选择及隔离是物种形成过程的三个基本环节，通过它们的综合作用，种群产生分化，最终导致新物种的形成。

3. 隔离就是指同一物种不同种群间的个体，在自然条件下基因不能自由交流的现象。包括地理隔离和生殖隔离。其作用就是阻断种群间的基因交流，使种群的基因频率在自然选择中向不同方向发展，是物种形成的必要条件和重要环节。

4.物种形成与生物进化的区别：生物进化是指同种生物的发展变化，时间可长可短，性状变化程度不一，任何基因频率的改变，不论其变化大小如何，都属进化的范围，物种的形成必须是当基因频率的改变在突破种的界限形成生殖隔离时，方可成立。

5.生物体的每一个细胞都有含有该物种的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因。

6.在生物体内，细胞没有表现出全能性，而是分化为不同的组织器官，这是基因在特定的时间和空间条件下选择性表达的结果。

什么是基因工程？基因工程操作的基本技术路线是什么

基因工程的基本操作程序的内容如下：

基因工程的基本操作程序指的是生物基因工程技术中的一种操作的程序。

1、目标获取

从基因文库中获取：

（1）基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。

（2）基因文库的种类：1、基因组文库；2、部分基因文库。

利用PCR技术扩增目的基因：

（1）PCR含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核糖合成技术。全称是多聚酶链式反应。

（2）PCR原理：DNA双链复制。

（3）前提条件：有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。来源:https://faiemp.cn/cshi/202501-183.html

（4）扩增过程：目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，在DNA聚合酶的作用下进行延伸，如此重复循环多次。

（5）结果：每次循环后的目的基因的量增加一倍，即成指数形式扩增。

人工合成：

如果基因较小，核苷酸序列又已知，可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。

2、载体构建

组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因。

功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代；2、使目的基因能够表达和发挥作用。来源:https://faiemp.cn/cshi/202412-34.html

步骤：

⑴用一定的限制酶切割质粒，使之出现一个黏性末端切口。

⑵用同种限制酶切割目的基因，产生相同的黏性末端。

⑶将目的基因片段插入质粒切口，加入适量DNA连接酶，使目的基因与质粒形成重组质粒。来源:https://www.faiemp.cn/cshi/202501-152.html

⑷基因表达载体的构成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。

关于基因工程：来源:https://faiemp.cn/cshi/202501-182.html

基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品的遗传技。来源:https://ewtuny.cn/cshi/202501-177.html

基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。它是生物工程的一个重要分支，它和细胞工程、酶工程、蛋白质工程和微生物工程共同组成了生物工程。所谓基因工程是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术。来源:https://www.ewtuny.cn/xwzx/202412-51.html

基因工程最突出的优点是打破了常规育种难以突破的物种之间的界限，可以使原核生物与真核生物之间、动物与植物之间，甚至人与其他生物之间的遗传信息进行重组和转移。人的基因可以转移到大肠杆菌中表达，细菌的基因可以转移到植物中表达。

基因工程操作的基本技术路线是什么来源:https://faiemp.cn/cshi/202412-22.html

基因工程的主要操作步骤包括：⑴目的基因的制备,所谓目的基因就是按照设计所需要转移的具有遗传效应的DNA片段.目的基因可以人工合成,也可以用限制性核酸内切酶从基因组中直接切割得到.⑵目的基因与克隆载体的重组,所谓克隆载体就是承载和保护目的基因带入受体细胞的运载者,如质粒,λ噬菌体,病毒等.⑶重组体转入受体细胞,所谓受体细胞就是接受外源目的基因的细胞,大肠杆菌是用得最多的原核细胞受体,另外,动物细胞、植物细胞都可作为受体细胞,把带有目的基因的重组体转入受体细胞要用到各种物理的、化学的和生物的方法.⑷克隆子的筛选和鉴定,带有目的基因的克隆子有没有组合到受体细胞的基因组中去,目的基因有没有在宿主细胞中通过转录、翻译表达出预先设计中想要得到的产物和表达产物如何分离、纯化等技术内容.

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